高效液相色谱仪的色谱柱基础介绍

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高效液相色谱仪的色谱柱基础介绍

色谱柱是髙效液相色谱仪的最重要的部件：柱材料、柱规格、柱填料、保护柱、柱接头、链接管。

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1. 柱材料

常用内壁抛光的不锈钢管作色谱柱的柱管以获得髙柱效。使用前柱管先用氣仿、甲醇、水依次清洗，再用50%的HN03对柱内壁作钝化处理。钝化时使HN03在柱管内至少滞留10 min, 以在内壁形成钝化的氧化物涂层。

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2. 柱规格

一般采用直形柱管，标准填充柱柱管内径为4.6 mm或3. 9m m ,长10〜50 cm，填料粒度5〜10/xm时，柱效达7000〜10000块/m 理论塔板数。使用3〜5 pm填料，柱长可减至5〜10 cm。当使用内径在0. 5〜1. 0 mm的微孔填充柱或内径为30〜50 pm的毛细管柱时，柱长为15〜50 cm。当使用粗内径短柱或细内径长柱时，应注意由于柱内体积减小，由柱外效应引起的峰形扩展不可忽视。此时应对进样器、检测器和连接接头作特殊设计以减少柱外死体积。这对仪器和实验技术提出了更高的要求。但这样会降低流动相的消耗量并提髙检测灵敏度。

3 .柱填料

高效液相色谱柱装填的固定相粒度多为5〜10µm或3〜5 µm,以全多孔球形或无定形硅胶、三氧化二铝、二氧化锆、苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球、脲醛树脂微球为基体，其表面经化学改性并经化学键合制成：非极性烷基（C4、Cs、C18) 、苯基固定相，弱极性的酚基、醚基、二醇基、芳硝基固定相和极性腈基、胺基、二胺基固定相；具有磺酸基和季铵基的离子色谱固定相；具有不同孔径的凝胶色谱固定相。

近年还研制了以2〜4 µm的非多孔硅胶、二氧化锆和朦醛树脂-二氧化锆复合微球为基体的键合固定相，以解决高分子量的生物大分子蛋白质、核酸的快速分析问题。

4 .保护柱

保护柱为内径2.0〜4. 6 m m ,长度不超过3 cm的短柱，填充和分析柱相同的固定相，它的作用是收集、阻断来自进样器的机械杂质和化学杂质，以保护和延长分析柱的使用寿命。保护柱填充的填料是消耗品，通常分析50〜100次样品就应更换，使用保护柱会使分析柱柱效稍有损失，&用得当对分离效果无影响。有些厂商将流路过滤器和保护柱组装成一个单元，安装在进样器和分析柱之间，使用很方便。

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5 .柱接头和连接管

柱接头通过过滤片与色谱柱管连接，在色谱柱管的上、下两端要安装过滤片，过滤片一般用多孔不锈钢烧结材料。此烧结片上的孔径小于填料颗粒直径，却可让流动相顺利通过，并可阻挡流动相中的极小的机械杂质以保护色谱柱。柱出、入口的连接管的死体积亦应愈小愈好，一般常用窄孔（内径0.13m m )的厚壁（1.5〜2.0 mm) 不镑钢管，以减少柱外死体积。所用柱接头，连接蜾帽，密封圈皆为不锈钢材料。